Die Vereine, die nach dem 34. Spieltag (Letzter Spieltag der Saison) auf dem 3. und dem 16. Platz sind müssen in die Relegation. Der Drittplazierte muss gegen den Sechzehnten der ersten Bundesliga um den Aufstieg in die erste Liga spielen und der Sechzehnte der 2. Liga muss gegen den Dritten der dritten Liga ran.
Für die Relegation um den Aufstieg aus der 2. Bundesliga und auch um den Abstieg gibt es jeweils ein Hin- und Rückspiel.

Hinrunde:
13.05.2010 20.30Uhr 1. FC Nürnberg - FC Augsburg 1:0
14.05.2010 20.30Uhr FC Ingolstadt 04 - Hansa Rostock 1:0

Rückrunde:
16.05.2010 18.00Uhr FC Augsburg - 1. FC Nürnberg 0:2
17.05.2010 20.30Uhr Hansa Rostock - FC Ingolstadt 04 0:2